张佳乐, 李家任, 张雅轩, 李超然, 乔婧, 姚璐, 牛愉捷, 郝肖琼
目的:观察BV-2小胶质细胞在氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)中鞘氨醇激酶2(SphK2)的表达情况,并探讨SphK2是否参与了OGD/R致BV-2小胶质细胞的损伤过程。方法:采用小鼠BV-2小胶质细胞制备OGD/R模型,选取氧糖剥夺时间为2 h,复氧复糖时间为0 h,3 h,6 h,12 h,24 h。(1)设对照组,OGD 2 h组,OGD 2 h/R 3 h组,OGD 2 h/R 6 h组,OGD 2 h/R 12 h组,OGD 2 h/R 24 h组,观察细胞形态变化。细胞经OGD/R处理后CCK-8法检测细胞存活率。(2)设对照组,OGD 2 h/R 12 h组,OGD 2 h/R 12 h+ABC294640(SphK2特异抑制剂)组,用q-PCR及Western blot测定SphK2的基因及蛋白表达变化。结果:与对照组相比,随着OGD/R时间的延长,BV-2活力逐渐下降(P<0.001),细胞形态发生了不同程度的改变,且有不同程度的损伤;通过观察细胞生存情况确定OGD2 h/R12 h为最适宜的OGD/R时间,与对照组相比,经OGD/R处理后BV-2细胞中SphK2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),加入ABC294640显著抑制其表达升高(P<0.001);与对照组相比,经OGD/R处理后BV-2细胞中SphK2蛋白表达水平显著升高(P<0.001),加入ABC294640后,SphK2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论:OGD/R损伤后的小胶质细胞可以被SphK2激活,在其损伤过程中发挥着调控作用。