目的: 构建大鼠戊型肝炎病毒(rat hepatitis E virus, Rat HEV)重组亚单位疫苗并评估其抗病毒免疫保护效力。方法: 通过PCR扩增Rat HEV-ORF3和Rat HEV-ORF2截短片段(413-419 aa、413-436 aa、432-436 aa、404-594 aa、357-594 aa),利用Overlap PCR构建ORF3-ORF2融合基因并诱导表达重组疫苗蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后免疫Wistar大鼠,采用ELISA动态监测血清特异性IgG效价及与病毒结合作用,巢式PCR检测攻毒后粪便病毒载量以评价保护效果。结果: 成功构建并表达6组重组蛋白。其中Rat HEV-ORF2(P239)蛋白诱导的抗体效价最高(1∶204 800),显著优于其他融合蛋白组(P＜0.001)。攻毒实验显示,P239组大鼠在感染后8~21 d便中均未检出病毒RNA,而其他组(含ORF3融合截短体)仍持续排毒。结构分析表明,P239保留ORF2完整的P结构域(含免疫显性表位)及M-P结构域协同构象,是其高效保护的关键。结论: Rat HEV-ORF2(P239)通过维持ORF2天然构象及保守表位,可诱导强效体液免疫并完全阻断病毒复制,展现出显著的疫苗开发潜力。本研究为Rat HEV亚单位疫苗的设计提供了实验依据。

目的: 探讨滋阴降火中药双百五骨汤联合标准四联西药治疗阴虚火旺型肺结核的治疗效果与安全性。方法: 选取中医证候阴虚火旺型肺结核患者60例,随机分为观察组和对照组。观察组接受标准四联方案联合双百五骨汤治疗,对照组仅接受标准四联方案,两组疗程均为2个月。比较两组红细胞沉降率复常情况、胸部CT病灶吸收程度、中医证候积分及药物性肝功能损伤率。结果: 观察组的治疗总有效率为75.0%,明显高于对照组。观察组的中医证候恢复率及血沉复常率分别为100%和90.6%,均显著优于对照组。观察组药物性肝功能损伤率为3.1%,显著低于对照组的44.0%。结论: 双百五骨汤联合标准四联西药方案治疗阴虚火旺型肺结核,可协同增强疗效,促进症状缓解与病灶吸收,并能显著降低抗结核药物所致肝损伤风险,安全性良好,值得临床推广应用。

目的: 探究细胞水平低氧预适应神经保护作用的分子机制,为低氧/缺血性疾病的防治提供实验依据和靶点策略。方法: 收集脑卒中、远端缺血预适应(remote ischemic preconditioning, RIPC)、低氧预适应(hypoxic preconditioning, HPC)、氧糖剥夺/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤模型的相关数据,应用网络药理学对相关数据库的潜在靶点交集进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析,发现周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2, CDK2)可能是低氧/缺血预适应神经保护的潜在靶点;在SH-SY5Y细胞中,通过转染CDK2过表达质粒和CDK2-siRNA,对CDK2基因进行过表达和敲低;采用流式细胞术和CCK8法检测细胞凋亡和活力,以评估神经保护作用;Western Blotting验证过表达/敲低CDK2对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)蛋白的影响。结果: 在SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤模型中,与OGD/R组相比,HPC+OGD组细胞凋亡减轻(P=0.033 9),细胞活力提高(P=0.001 6);敲低CDK2后,与对照组相比,敲低CDK2组细胞凋亡减少(P=0.007 3),细胞活力升高(P=0.002 1);过表达CDK2后,与对照组相比,过表达CDK2组细胞凋亡增多(P=0.008 8),细胞活力下降(P＜0.000 1);敲低CDK2基因可使p-mTOR与HIF-1α表达上调(P=0.000 3,P=0.008 3);过表达CDK2可使p-mTOR与HIF-1α表达下调(P=0.036 1,P=0.006 9)。结论: 低氧预适应能够发挥神经保护作用,其机制可能通过调控CDK2/mTOR/HIF-1α通路实现。

目的: 探讨外周血儿茶酚胺-O-甲基转移酶(catechol-o-methyltransferase, COMT) 基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达水平与帕金森病(Parkinson's disease, PD) 发生发展的相关性。方法: 收集本院80例PD患者和61例健康体检者作为PD组和对照组,外周血中COMT mRNA表达水平采用实时定量PCR法(Q-PCR)检测,COMT基因启动子区域的DNA甲基化状态使用甲基化特异性PCR法进行测定。结果: PD组外周血COMT基因启动子区甲基化水平显著低于对照组( P＜0.05),且mRNA水平显著高于对照组(P＜0.05)。与早期PD患者相比,中晚期PD患者COMT基因启动子甲基化程度更低,mRNA表达更高,差异有统计学意义(P＜0.05)。PD组患者外周血COMT mRNA与其启动子区甲基化状态存在显著负相关(r=-0.316,P=0.004),与 UPDRS 总评分(r=0.274,P=0.014)、UPDRS 运动症状评分(r=0.328,P=0.003)、UPDRS非运动症状评分(r=0.256,P=0.022)均呈正相关。经二元Logistic回归分析显示,COMT mRNA表达水平升高是PD发病的危险因素(OR=2.583,95%CI:1.106-6.033,P=0.028),COMT基因启动子区高甲基化状态、高胆固醇血症是PD发病的保护因素(OR=0.266,95%CI:0.117-0.607,P=0.002;OR=0.470,95%CI:0.252-0.876,P=0.018)。结论: PD患者外周血COMT基因启动子区甲基化水平降低、mRNA表达上调,且随着PD患者Hoehn-Yahr分期的加重呈动态演变,COMT基因启动子的低甲基化可能通过促进其基因转录,进而参与PD的病理进程。

目的: 为满足疫苗制备中重组抗原对高溶解度和纯度的要求,通过基因工程技术改造表达载体,旨在构建一种能有效促进蛋白可溶性表达并实现高纯度分离纯化的重组载体。方法: 采用分子克隆技术,以Msc Ⅰ和BamH Ⅰ为酶切位点对原载体进行改造:(1)切除肠激酶位点和S-标签等非必须序列;(2)添加特异性凝血酶切位点和6×His纯化标签;随后,以A型肉毒毒素重链羧基端(BONT/A-Hc)基因为模板扩增目的片段,构建重组表达载体pET-32a(+)-BoNT/A-Hc。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析蛋白的表达形式,并利用Ni-NTA亲和层析结合梯度咪唑洗脱策略进行蛋白纯化。结果: (1)成功构建了短片段型表达载体,测序验证各元件插入无误;(2)在对目的蛋白进行表达研究时,采用SDS-PAGE结果表明目的蛋白在37 ℃诱导条件下主要以包涵体形式表达;采用Western blot 结果验证表达出来的蛋白是目的蛋白。(3)对表达蛋白进行纯化后,获得纯度较高的重组BoNT/A-Hc蛋白。结论: 本研究建立的载体改造策略在提升目的蛋白纯化效率的同时,显著提升了蛋白表达的稳定性,为重组亚单位疫苗的大规模研究提供了关键技术支持。

目的: 探讨蜂王浆(royal jelly, RJ)活性成分对肝癌细胞HepG2中角鲨烯环氧化酶(squalene epoxidase, SE)表达的影响。方法: 通过活性馏分方法将RJ原液分离成大分子、小分子、脂溶性和水溶性RJ组分,分别作用于HepG2细胞,通过实时定量PCR(Real-time PCR)检测角鲨烯环氧化酶基因的表达,应用CCK-8法检测RJ活性成分对细胞活性的影响。结果: RJ各组分均能不同程度抑制HepG2细胞活性、降低SE基因表达,其中水溶性成分(＜10 kDa)抑制细胞活性和降低SE基因表达的效果最为显著。结论: RJ活性成分可下调HepG2细胞中SE基因表达,提示RJ可能通过该途径降低机体胆固醇水平,其中水溶性物质(＜10 kDa)是降低胆固醇的主要活性成分。

目的: 观察脑缺血再灌注损伤后血管生成的时相规律及相关调控机制,为缺血性脑损伤的干预寻找最佳的时间窗口。方法: 120只SD雄性大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R)和假手术组(Sham)各60只,每组按术后取材时间分为1 d组、3 d组、7 d组和14 d组,每组5只大鼠。采用大脑中动脉闭塞构建缺血再灌注模型。通过免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子(VEGF)阳性标记的细胞在皮层缺血半暗带的表达情况;用FITC-葡聚糖标记血浆,激光共聚焦显微镜下观察脑血浆灌注量、微血管直径及形态;Western Blotting检测皮层缺血半暗带区VEGF、Notch受体细胞内结合域(NICD)蛋白的表达情况。结果: (1)I/R组脑缺血再灌注损伤后,7 d组缺血半暗带血浆灌注量高于3 d组(P＜0.05);(2)与Sham组相比,I/R组缺血半暗带在术后各时相点＞2 μm且≤4 μm直径的微血管占比均增加,而＞4 μm且≤6 μm直径的微血管占比均减少;I/R组VEGF表达术后各时相点均高于Sham组(P＜0.05),且在7 d组达到峰值;(3)I/R组在术后NICD和VEGF蛋白的表达量分别在3 d组和7 d组达到最高。结论: 大鼠脑缺血再灌注后,缺血半暗带血流灌注及微血管数量呈现先随时间上升,后趋于平缓的变化趋势;NICD和VEGF表达呈现先升后降的时相性变化,VEGF-Notch信号通路在此过程中发挥重要的调节作用。

目的: 探究右美托咪定(dexmedetomidine, Dex)预处理通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对大鼠脑缺血-再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)的保护作用。方法: 选取健康Wistar大鼠84只,采取随机数字表法分组,分别为假手术(Sham)组,模型(Model)组按照再灌注时间分为24 h组、72 h组、120 h组,Dex组按照再灌注时间分为24 h组、72 h组、120 h组,共7组,每组12只;采用Zea-Longa评分法和旷场实验评估大鼠神经运动功能;尼氏染色法观察尼氏小体结构形态;Western blot检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果: 与假手术组比较,模型组大鼠的Zea-Longa评分升高、旷场运动总距离增加、尼氏小体结构破损,PI3K、AKT蛋白表达水平下降,NF-κB表达量上调(均P＜0.05)。与模型组相比,Dex组Zea-Longa评分下降、旷场运动总距离减少、尼氏小体结构较完整,NF-κB蛋白表达水平下降,PI3K、AKT蛋白表达水平上升(P＜0.05)。结论: Dex预处理可能通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路减轻炎症反应改善CIRI模型大鼠的脑损伤。

目的: 检测冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease, CHD)患者血浆中miR-145的表达,探讨其作为评估急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)患者病变严重程度、斑块易损性指标的可行性。方法: 选取2023年11月-2024年11月于包头市中心医院心内科住院并行冠状动脉影像学检查的患者120例,其中急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)、不稳定型心绞痛(unstable angina, UA)患者各30例纳入ACS组;稳定型心绞痛(stable angina pectoris, SAP)组30例;血管无异常者30例纳入对照组。应用实时定量PCR技术(RT-qPCR)检测血浆miR-145相对表达量,借助光学相干断层成像技术(optical coherence tomography, OCT)观察并记录罪犯斑块形态、性质。结果: (1)与对照组相比,SAP组、ACS组血浆miR-145表达水平均明显降低(P＜0.001);且与SAP组比较,ACS组血浆miR-145表达水平明显降低(P＜0.001)。(2)miR-145表达水平与罪犯斑块最小纤维帽厚度呈正相关(P＜0.001),与斑块最大脂质弧度、最大纤维斑块长度呈负相关(P＜0.001),与最小管腔面积无明显相关性(P＞0.05)。结论: :血浆miR-145对ACS患者病变严重程度、斑块易损性的评估具有预测价值。

目的: 探讨基于计算机断层扫描(computed tomography, CT)体成分表型在急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)临床与影像严重程度评估中的应用价值。方法: 回顾性分析206例AP患者临床及CT影像资料,测量第3腰椎层面骨骼肌指数(L3 skeletal muscle mass index, L3 SMI)、肌间脂肪组织(intermuscular adipose tissue, IMAT)及内脏/皮下脂肪比值(visceral-to-subcutaneous fat ratio, VSR),据此构建四种体成分表型。采用床旁急性胰腺炎严重程度评分(bedside index for severity in acute pancreatitis, BISAP)及改良CT严重指数(modified CT severity index, MCTSI)分别评估AP患者严重程度。通过Spearman相关性分析、Logistic回归分析及受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线探究各体成分参数及其表型与AP严重程度关系。结果: ①临床重症化(BISAP分层):单因素分析显示,VSR、IMAT及肌肉减少症(sarcopenia, SP)与AP重症化显著相关(均P＜0.05),L3 SMI无统计学意义;其中表型D发生重症AP风险最高(OR=10.5,P=0.001)。多因素回归显示,年龄、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR)及C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是独立危险因素(均P＜0.05),体成分表型整体无独立预测价值。ROC分析提示,由年龄、炎症指标及体成分参数构建的联合预测模型曲线下面积(area under the receiver operating characteristic curve, AUC)达0.883(95% CI: 0.816-0.951),预测效能显著优于单项指标(单项指标中VSR预测效果优于CRP)。②影像学严重程度(MCTSI分层):单因素分析显示,仅表型D表现出显著相关性(OR=3.333, P=0.046),其余单项未呈现统计学意义(均P＞0.05)。多因素分析显示,年龄(P=0.008)与CRP(P=0.027)是独立危险因素,体成分表型整体及表型D均无统计学意义(均P＞0.05)。ROC分析显示,年龄与CRP联合模型具有一定预测能力(AUC=0.679),其中年龄表现最稳定(AUC=0.643,P=0.001);单项VSR与CRP无统计学意义(均P＞0.05)。结论: 基于CT评估的表型D(肌少症且内脏脂肪优势型)在AP患者病程进展中具有重要的价值。尽管多因素分析显示其独立预测价值受限,但临床评估中可将该体成分表型与年龄、CRP及NLR等独立危险因素相结合,构建多维评估体系以实现AP患者的早期精准管理。

目的: 探讨腹腔镜阑尾切除术中行腹腔冲洗治疗小儿急性化脓性阑尾炎合并腹膜炎的临床疗效。方法: 回顾性分析61例行腹腔镜阑尾切除术患儿的临床资料,根据术中是否行腹腔冲洗分为研究组(22例)和对照组(39例)。对比两组住院时间、术后并发症发生情况及围术期炎症、免疫相关指标。结果: 研究组住院时间短于对照组[9(7,9)d vs. 10(9,12)d,P=0.004];两组术后并发症发生率对比差异无统计学意义。术后12 h,研究组血清C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)水平低于对照组(P=0.009);术后72 h,研究组白细胞计数(white blood cell count, WBC)、中性粒细胞百分比(neutrophil percentage, NEUT)及CRP水平均优于对照组(均P＜0.05);两组降钙素原(procalcitonin,PCT)水平对比无显著差异(均P＞0.05)。免疫指标方面,两组术前各项指标差异均无统计学意义(均P＞0.05);术后72 h,研究组IgA(P＜0.001)、IgM(P＜0.001)水平高于对照组,其余免疫指标差异无统计学意义(均P＞0.05)。结论: 腹腔镜阑尾切除术中腹腔冲洗能有效减轻患儿早期炎症反应,改善免疫功能,缩短住院时间。

目的: 分析不同程度羊水胎粪污染对新生儿结局的影响,为临床诊疗提供指导。方法: 收集2023年1月-2024年1月包钢集团第三职工医院482例羊水胎粪污染产妇临床资料,按羊水污染严重程度分为Ⅰ度(n=292)、Ⅱ度(n=132)、Ⅲ度(n=58)三组,收集母婴临床资料,根据新生儿预后分为良好结局组(n=429)与不良结局组(n=53),比较两组特征差异;将不良结局新生儿分为轻、重度污染亚组,采用Logistic回归分析不良结局危险因素。结果: 三组产妇年龄、孕周、羊水指数(amniotic fluid indexes, AFI)及脐动脉血流参数比较,差异有统计学意义(均P＜0.05);妊娠期高血压发生率随污染程度升高而上升,Ⅲ度组阴道分娩率最高。三组新生儿无死亡病例,不良结局发生率随污染程度升高而增加(P＜0.001),Ⅲ度组Apgar评分更低、炎症指标更高。不良结局组高龄、妊娠期高血压、阴道分娩比例更高,产妇年龄、羊水及脐动脉血流相关指标异常更明显,重度污染亚组母婴相关异常指标更突出。Logistic回归显示,产妇年龄、羊水污染程度、AFI、AFV是新生儿不良结局独立危险因素(均P＜0.001)。结论: 羊水胎粪污染程度与母婴多项指标密切相关,重度羊水污染、产妇高龄、羊水指标异常是新生儿不良结局的独立危险因素,临床需重视评估并实施个体化管理。

缺血性卒中(Ischemic Stroke, IS)的病理机制涉及脑缺氧诱发的线粒体功能障碍,可导致神经元能量代谢紊乱和细胞凋亡。研究表明,隧道纳米管TNT作为由F-肌动蛋白构成的细胞间通道,能够介导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向受损神经元转移功能性线粒体,从而重建其氧化磷酸化能力。低氧预适应(hypoxic preconditioning, HPC)通过诱导亚致死性低氧应激,可显著增强BMSCs的线粒体生物合成和抗凋亡能力,提高其存活率和增殖潜能。该预处理方式不仅促进BMSCs向缺血区域定向迁移,还能提高线粒体转移效率,进而改善神经元ATP合成、减轻活性氧(reactive oxygen species, ROS)损伤,最终实现神经功能保护。本文系统综述了HPC调控BMSCs介导的线粒体移植治疗IS的最新研究进展及其分子机制。

脑卒中后上肢功能障碍严重影响患者的日常生活能力和生活质量,其康复治疗是临床重点。基于脑可塑性理论,脑-肢协同康复模式整合中枢与外周干预技术,通过多靶点协同刺激促进神经功能重组与运动功能恢复。该模式按干预技术可分为现代康复、中医康复及中西医结合康复三类;按时序可分为同步与非同步两种干预策略。本文系统综述脑-肢协同康复模式(brain-limb collaborative rehabilitation model)的基本内涵、分类方法以及其在脑卒中上肢康复中的临床应用,涵盖重复经颅磁刺激、经颅直流电刺激、脑机接口、镜像疗法以及头针等技术的联合应用,以期为患者提供更精准的康复方案。

光动力(photodynamic therapy, PDT)和声动力(sonodynamic therapy, SDT)疗法是两种基于活性氧(reactive oxygen species, ROS)杀伤肿瘤细胞的非侵入性癌症治疗方法。PDT经光激活光敏剂、SDT由超声激活声敏剂发挥作用,二者均具有组织穿透性强、靶向性高及可联合放化疗的优势。近二十年,二者在敏化剂开发、机制解析及临床应用方面取得了显著进展,但仍受限于敏化剂生物相容性欠佳、深层肿瘤穿透效率低及个体化治疗方案不足等问题,未来需聚焦新型敏化剂设计、参数优化及多疗法联合,以推动其成为恶性肿瘤治疗的重要选择。本文通过文献综述与数据分析,系统总结了PDT与SDT的研究现状与发展趋势。